Wet van Lambert-Beer Calculator

Wat kunt u met deze calculator?

De calculator is onderverdeeld in vier tabbladen, elk gericht op een specifiek onderdeel van spectrofotometrische berekeningen:

Wat is de wet van Lambert-Beer?

De wet van Lambert-Beer beschrijft de relatie tussen de absorptie van licht en de eigenschappen van het medium waardoor het licht passeert. Ze combineert de wet van Lambert (absorptie evenredig met de weglengte) en de wet van Beer (absorptie evenredig met de concentratie):

Hierbij is A de absorptie (dimensieloos), ε de molaire extinctiecoëfficiënt in L·mol⁻¹·cm⁻¹, c de concentratie in mol/L en l de optische weglengte van de cuvet in cm. De standaard laboratoriumcuvet heeft een weglengte van 1 cm.

Voor spectrofotometrische metingen vindt u bij Labvakhandel spectrofotometers en UV/Vis apparatuur en cuvetten.

Absorptie en transmissie

De absorptie (A) is gerelateerd aan de transmissie (T = I/I₀) via de negatieve logaritme:

Bij een blanco (referentiemeting) is T = 1 en A = 0. Een absorptie van 1,0 correspondeert met een transmissie van 10%: slechts 1 op de 10 fotonen passeert de oplossing.

Lineair meetbereik

De wet van Lambert-Beer is alleen geldig binnen het lineaire bereik van het instrument. Als praktische richtlijn geldt:

• A < 0,1 — signaal te laag; overweeg hogere concentratie of langere cuvet
• A 0,1–0,8 — optimaal meetbereik; beste nauwkeurigheid
• A > 1,0 — verdun de oplossing voor een betrouwbare meting

De laagste relatieve meetfout treedt op bij A ≈ 0,434 (overeenkomend met %T ≈ 36,8%).

Voor het nauwkeurig verdunnen van monsters heeft u pipetten en liquid handling en volumeglaswerk nodig.

Extinctiecoëfficiënten van veelgebruikte stoffen

De extinctiecoëfficiënt is stofspecifiek en golflengte-afhankelijk. Veelgebruikte waarden zijn onder meer NADH bij 340 nm (ε = 6.220 L·mol⁻¹·cm⁻¹), hemoglobine (oxy) bij 415 nm (ε = 125.000 L·mol⁻¹·cm⁻¹) en p-nitrofenol bij 405 nm (ε = 18.300 L·mol⁻¹·cm⁻¹). Raadpleeg altijd de bronliteratuur of het SDS-document voor de exacte waarde bij uw meetomstandigheden.

Beperkingen van de wet

De wet van Lambert-Beer is niet altijd geldig bij hoge concentraties (moleculaire interacties), polychromatisch licht, sterke lichtverstrooiing in troebele oplossingen, chemische evenwichten in oplossing of bij fluorescerende stoffen. Voer bij twijfel een lineairiteitsmeting uit over een verdunningsreeks.

Toepassingen van de wet van Lambert-Beer

De wet van Lambert-Beer wordt breed toegepast in uiteenlopende laboratoriumomgevingen. In de biochemie wordt ze gebruikt voor de kwantificering van eiwitten (Bradford, BCA), nucleïnezuren (260 nm) en co-enzymen zoals NADH (340 nm). In de analytische chemie vormt ze de basis voor kleurreacties en iontests. In de microbiologie wordt de wet gebruikt bij OD-metingen voor celgroei (OD600). In de farmaceutische kwaliteitscontrole is UV/Vis-spectrofotometrie een standaard methode voor zuiverheidsbepaling van werkzame stoffen.

Veelgestelde vragen

Waarom wijkt mijn meting af bij hoge concentraties?

Bij hoge concentraties treden moleculaire interacties op die de lineariteit verstoren. Verdun het monster zodat de absorptie onder 0,8 komt.

Welke cuvetlengte gebruik ik?

De standaard laboratoriumcuvet heeft een weglengte van 1 cm. Voor zeer lage concentraties kunt u een cuvet van 5 of 10 cm gebruiken om de gevoeligheid te verhogen.

Wat is het verschil tussen absorptie en extinctie?

In de praktijk worden de termen door elkaar gebruikt. Strikt genomen beschrijft extinctie ook verliezen door verstrooiing, terwijl absorptie alleen lichtabsorptie door het molecuul beschrijft. Bij heldere oplossingen is het verschil verwaarloosbaar.

Welk golflengte kies ik voor mijn meting?

Gebruik de absorptiemaxima van de te meten stof — dit geeft de hoogste gevoeligheid en de beste lineariteit. Raadpleeg het absorptiespectrum van uw stof of de literatuurwaarde van de extinctiecoëfficiënt.

Gerelateerde rekentools

Naast deze calculator biedt de Labvakhandel Kennisbank ook rekentools voor kalibratie en meetnauwkeurigheid (ijklijn, recovery%, herhaalbaarheid), molariteit en molaliteit en statistiek en data-analyse.