Aseptische techniek: principes, uitvoering en praktijk in het laboratorium

Aseptische techniek is het geheel van handelingen waarmee wordt voorkomen dat micro-organismen een steriel product, monster, kweek of systeem bereiken. Waar steriliteit een eigenschap is van een materiaal of oppervlak, is aseptisch werken een werkwijze: het is de discipline waarmee de steriliteitsstatus tijdens uitvoering behouden blijft. In microbiologie, celkweek, farmaceutische bereiding en klinische diagnostiek is aseptische techniek de basis voor betrouwbare resultaten en veilige eindproducten. Dit artikel behandelt de principes, de standaardhandelingen, de benodigde materialen en de meest voorkomende foutbronnen, aangevuld met een schema van de werkflow en veelgestelde vragen.

Wat is aseptische techniek?

Aseptische techniek is een gestandaardiseerde werkwijze die de overdracht van micro-organismen naar een steriele omgeving, monster of cultuur voorkomt. De methode combineert vier elementen: gesteriliseerde materialen, een gecontroleerde werkomgeving, een gedisciplineerde uitvoerder en een validatiestap achteraf. De techniek wordt toegepast telkens wanneer contaminatie het resultaat, het product of de patiënt in gevaar zou brengen — van het uitplaten van een agarplaat tot het bereiden van een parenteraal geneesmiddel.

Aseptisch werken staat niet los van de omgeving. In een gewone laboratoriumruimte volstaan een bunsenbrander en een schone werkbank. Bij celkweek of farmaceutische bereiding is een laminaire flow-kast of biologische veiligheidskast klasse II vereist, met bijbehorende omgevingsbeheersing conform ISO 14644 en EU GMP Annex 1. Welk kasttype past bij uw specifieke aseptische toepassing? De keuzewijzer voor werkkasten begeleidt u stap voor stap van uw beschermingsdoel naar het juiste kasttype.

Aseptisch versus steriel: wat is het verschil?

De twee begrippen worden vaak door elkaar gebruikt maar hebben een verschillende betekenis. Steriel is een toestand: het product bevat geen levensvatbare micro-organismen (SAL ≤ 10⁻⁶). Aseptisch is een werkwijze: het geheel van handelingen dat voorkomt dat een steriel product besmet raakt. Een steriel pipetpuntje verliest zijn steriliteitsstatus zodra het aseptisch niet correct wordt gehanteerd. Omgekeerd garandeert aseptisch werken alleen resultaat als de gebruikte materialen daadwerkelijk steriel zijn.

Schema van de vier fasen van aseptische techniek: voorbereiding, kritische zone, uitvoering en controle, met daaronder de kritische succesfactoren en besmettingsbronnen
Figuur 1 — De vier fasen van aseptisch werken met kritische succesfactoren en besmettingsbronnen.

De vier fasen van aseptisch werken

1. Voorbereiding

De werkplek wordt gedesinfecteerd met 70% ethanol of 70% isopropanol. De hogere waterfractie (30%) is essentieel: puur alcohol verdampt te snel om celwanden te penetreren. Alle materialen worden gecontroleerd op steriliteitsindicator, houdbaarheidsdatum en verpakkingsintegriteit. Autoclaveerbare materialen — glaswerk, PP-buizen, roestvaststalen instrumenten — worden vooraf gesteriliseerd in een autoclaaf bij 121 °C gedurende 15 minuten. Hittelabiele oplossingen worden steriel gefiltreerd via een 0,22 µm membraanfilter.

2. Kritische zone

De kritische zone is de fysieke ruimte waar het steriele product of monster wordt blootgesteld aan de omgeving. Rond een bunsenbrander ontstaat door de opstijgende warme luchtstroom een lokaal kiemvrije zone van circa 20 cm. In een LAF-kast wordt via HEPA-gefilterde lucht een deeltjesvrije werkzone gecreëerd. In beide gevallen geldt: hoe kleiner en korter de blootstelling van de kritische zone, hoe kleiner het besmettingsrisico.

3. Uitvoering

De handelingen worden vloeiend en met minimaal materiaalcontact uitgevoerd. Belangrijke regels: entogen (osen) worden voor en na gebruik door de vlam gehaald tot roodgloeiend; flesopeningen worden na het openen en voor het sluiten kort door de vlam gehaald; deksels worden op de rand van de werkbank gelegd (nooit met de opening naar boven); handen worden nooit boven open flessen of platen gehouden. Werk altijd van schoon naar vuil en van de meest kwetsbare naar de minst kwetsbare stap.

4. Controle

Aseptisch werken is pas compleet als het resultaat aantoonbaar is. Bij microbiologische kweek geldt een negatieve controle (niet-geinoculeerde plaat) als bewijs dat het medium en de techniek kiemvrij zijn. Bij farmaceutische aseptische bereiding worden settle plates (open geplaatste agarplaten) en contactplaten gebruikt om luchtkwaliteit en oppervlakcontaminatie in de kritische zone continu te bewaken. Alle uitgevoerde stappen worden vastgelegd in een elektronisch labjournal of LIMS.

Standaardhandelingen in aseptische techniek

Aseptisch werken staat of valt met betrouwbaar gesteriliseerd glaswerk, kweekmedia en verbruiksartikelen. Voor de keuze van een geschikte autoclaaf voor uw batchgrootte en cyclustype (vloeistof, verpakt materiaal of destructie) kunt u de autoclaaf-keuzewijzer raadplegen.

Wat zijn aseptische handelingen?

Aseptische handelingen zijn alle uitvoeringshandelingen waarmee de steriliteitsstatus van een product, monster of kweek behouden wordt op het moment dat het in contact komt met de omgeving, de uitvoerder of een instrument. Ze zijn te onderscheiden in vier categorieën:

  • Omgevingsvoorbereiding — desinfectie van werkoppervlakken en instrumenten met 70% ethanol of 70% isopropanol; werken in een laminaire flow-kast of bij een bunsenbrander.
  • Materiaalbehandeling — hanteren van steriele verpakkingen zonder het steriele inwendige te raken; controleren van houdbaarheidsdatum, verpakkingsintegriteit en steriliteitsindicator vóór gebruik.
  • Uitvoeringshandelingen — pipetteren, overbrengen, enten, vlamsteriliseren en openen van flessen en buizen met minimale blootstelling van het kritische contactoppervlak aan de omgeving.
  • Validatiehandelingen — plaatsen van een negatieve controle, gebruik van settle plates en, in een farmaceutische context, uitvoeren van een media fill-test om de aseptische werkwijze periodiek te toetsen.

De concrete uitvoering van de meest voorkomende aseptische handelingen — vlamsteriliseren, pipetteren, overbrengen en uitplaten — staat beschreven in de paragrafen hieronder.

Vlamsteriliseren van een entoog

De entoog (oosje) wordt schuin in de vlam gehouden, van het handvat naar de lus toe, tot de gehele draad roodgloeiend is. Laat de öse daarna kort afkoelen (5–10 seconden) boven de vlam — te heet doodt de over te dragen cellen; te koud biedt geen zekerheid over steriliteit. Voor grote hoeveelheden entlingen zijn infrarood-entoog-sterilisatoren een alternatief zonder open vuur.

Aseptisch pipetteren

Pipetteerhandelingen in aseptische context vereisen steriele, individueel verpakte of geautoclaveerde pipetpuntjes met filter. De verpakking wordt pas geopend in de kritische zone. Zet de pipet neer met de tip naar boven; leg deze nooit horizontaal op de werkbank waar de tip vloeistof kan opzuigen. Wissel de tip bij elk nieuw monster of medium om kruisbesmetting te voorkomen.

Aseptisch overbrengen tussen flessen

Verwijder de dop met de pink en de muis van dezelfde hand die ook de fles vasthoudt; houd de dop tussen deze vingers vast en raak de binnenkant nooit aan. Vlam de flesopening kort, giet of pipetteer over, vlam nogmaals en plaats de dop direct terug. Deze techniek beperkt de blootstellingstijd tot enkele seconden.

Wanneer aseptisch overbrengen wordt gecombineerd met steriliserende filtratie — bijvoorbeeld van een mediumadditief — kunt u het passende filtertype opzoeken in de filtratie-keuzewijzer.

Uitplaten en enten

Op een agarplaat wordt de druppel monster met een steriele Drigalski-spatel of een gebogen glazen staafje verdeeld. Bij de streepplaat-methode wordt de entoog in vier of vijf sectoren over de plaat gestreken, tussen elke sector wordt de öse opnieuw vlamgesteriliseerd. Deze techniek verdunt de kolonies zodanig dat na incubatie individuele kolonies zichtbaar worden.

Werken in een laminaire flow-kast (LAF)

Een LAF-kast levert HEPA-gefilterde lucht (ISO klasse 5, oftewel EU GMP graad A) direct over het werkoppervlak. De luchtsnelheid ligt typisch tussen 0,36 en 0,54 m/s. Belangrijke werkregels:

  • Zet de kast minimaal 15 minuten voor gebruik aan om een stabiele luchtstroom op te bouwen.
  • Reinig het werkoppervlak met 70% ethanol of IPA, ook aan de zijkanten en achterwand.
  • Plaats materialen zo dat de HEPA-lucht ononderbroken over alle steriele oppervlakken kan stromen — niet stapelen.
  • Werk 15 cm naar binnen ten opzichte van de voorrand; de rand is een turbulentiezone.
  • Vermijd snelle bewegingen die de laminaire stroming verstoren; beweeg de handen parallel aan de stroomrichting.
  • Gebruik in een LAF-kast geen open vuur: een bunsenbrander verstoort de luchtstroom en kan de HEPA-filter beschadigen. Gebruik in plaats daarvan een infrarood-entoog-sterilisator.

Voor werk met pathogenen of gemodificeerde organismen is een biologische veiligheidskast klasse II vereist — deze combineert operatorbescherming, productbescherming en omgevingsbescherming. Zie voor de keuze van kasttype en toepassing het artikel over zuurkasten en werkkasten. Voor werken met risicogroepen 1 tot 4 is aanvullend het bijbehorende BSL-veiligheidsniveau van toepassing.

Kritische succesfactoren

Factor Maatregel Waarom
Handen en huid Gedesinfecteerde handschoenen, geen sieraden, mouwen naar beneden Menselijke huid herbergt 10⁵ – 10⁶ kiemen per cm²
Adem en spraak Mondkapje en niet praten boven kritische zone Aerosolen dragen viabele micro-organismen tot 1 m ver
Werkoppervlak Voor en na sessie desinfecteren met 70% ethanol/IPA Neerslaande deeltjes zijn de belangrijkste oppervlakbron
Materiaal Verpakking pas openen in de kritische zone Buiten de zone bereikt luchtstof de steriele binnenkant
Lucht LAF- of veiligheidskast, deuren dicht, geen tocht Turbulentie vermindert de effectiviteit van HEPA-flow
Tijd Minimaliseer blootstelling van steriele oppervlakken Contaminatiekans stijgt lineair met openstellingstijd

Normatieve achtergrond

Aseptisch werken is in meerdere internationale normen en richtlijnen verankerd. De belangrijkste referenties zijn:

Norm / richtlijn Toepassingsgebied Kernelement
EU GMP Annex 1 (2022) Steriele geneesmiddelenproductie Cleanroom-klassen A, B, C, D; contamination control strategy
ISO 14644 Cleanrooms en gecontroleerde omgevingen Deeltjesconcentratieklassen ISO 1 tot ISO 9
ISO 14698 Biocontaminatie in cleanrooms Bewaking van microbiele belasting via settle plates
ISO 11135 / 11137 / 17665 Validatie van sterilisatieprocessen ETO, straling en stoomsterilisatie
Ph. Eur. 5.1.1 / USP 1116 Farmaceutische microbiologie Grenswaarden microbiele contaminatie per graad
ISO 15189 / ISO 17025 Medische en test-/kalibratielaboratoria SOP-verplichting voor aseptische handelingen

De geactualiseerde versie van EU GMP Annex 1 (van kracht sinds 25 augustus 2023) introduceert het begrip Contamination Control Strategy (CCS): een geintegreerd document waarin alle maatregelen ter voorkoming van microbiele, deeltjes- en endotoxine-contaminatie zijn vastgelegd. Zie voor de geldende Europese richtsnoeren de EudraLex Volume 4 — EU GMP-richtsnoeren van de Europese Commissie.

Toepassingen per vakgebied

Microbiologie

In een microbiologisch laboratorium is aseptische techniek de norm bij het bereiden van voedingsbodems, het enten van kweken, het overzetten van stammen en het uitvoeren van kolonietellingen. De streepplaatmethode, de verdunningsreeks en de kolonieoverzetting zijn allen alleen betrouwbaar bij consequent aseptisch werken.

Celkweek

Bij het passeren van cellijnen, het opzetten van nieuwe kweken en het ontdooien van vials is aseptisch werken onder een klasse II-veiligheidskast verplicht. De grootste risico's in celkweek zijn mycoplasmacontaminatie (onzichtbaar zonder specifieke assay) en kruisbesmetting tussen cellijnen. Aseptisch werken wordt aangevuld met authenticatie via STR-profilering en periodieke mycoplasma-tests. Zie voor de bijbehorende technieken het artikel over celkweektechnieken.

Aseptisch werken bij celkweek vraagt om een goed gekozen CO₂-incubator die betrouwbaar decontamineerbaar is. Welke incubatoruitvoering past bij uw celwerk, leest u in de oven en incubator keuzewijzer.

Farmaceutische bereiding

Aseptische bereiding is verplicht bij de productie van parenteralia, oogdruppels, infuusvloeistoffen en radiofarmaca die niet terminaal gesteriliseerd kunnen worden. De uitvoering geschiedt in een graad A-omgeving (isolator of LAF) binnen een graad B-cleanroom. Elke bereiding wordt gevolgd door een steriliteitstest volgens Ph. Eur. 2.6.1 en een media fill-simulatie om de aseptische handelingen periodiek te valideren.

In Nederland is voor apotheekbereidingen die niet onder de EU GMP Annex 1 voor industriële productie vallen een aanvullend kader van kracht. De GMP-Z-richtlijn (Goede Manieren van Produceren voor Ziekenhuisapotheken) beschrijft de minimumeisen voor aseptische bereiding in de ziekenhuisapotheek: klasseringen van werkruimten, validatie-eisen voor processen en apparatuur, monitoringfrequenties voor omgevingscontrole en documentatieverplichtingen voor elke bereiding. De richtlijn wordt beheerd door de NVZA (Nederlandse Vereniging van Ziekenhuisapothekers) en sluit aan op de EU GMP Annex 1-eisen, maar is toegesneden op de schaal en het productaanbod van de ziekenhuisapotheek. Openbare apotheken die bereidingen uitvoeren vallen in de praktijk onder vergelijkbare eisen via de NAN-regelgeving (Nederlandse Apotheek Norm), die de basisvereisten voor kwaliteitsborging van apotheekbereidingen vastlegt.

Klinische diagnostiek

Bloedkweken, punctaten en biopten worden onder aseptische condities afgenomen om vals-positieve resultaten uit te sluiten. Bij microbiologische diagnostiek is de scheiding tussen commensale flora en pathogenen alleen mogelijk als de monstername kiemvrij verloopt. Voor toepassing in medische laboratoria zie ook het artikel over ISO 15189-accreditatie.

Voedings- en waterlaboratoria

Bij Legionella-analyse, kiemgetalbepaling en indicatororganismen (E. coli, coliformen) is aseptisch werken essentieel om externe contaminatie van het analyseresultaat te voorkomen. Filterhouders, membraanfilters en pincetten worden autoclaafgesteriliseerd of geleverd als steriele wegwerpartikelen.

Meest voorkomende foutbronnen

  • Te lange openstellingstijd van flessen en platen — de kans op deeltjesneerslag stijgt sterk na 30 seconden.
  • Handen boven open materiaal — zelfs gehandschoende handen dragen aerosolen en huidschilfers.
  • Deksel omgekeerd neerleggen — de binnenkant komt in contact met de niet-steriele werkbank.
  • Onvoldoende afkoelen van een entoog na vlammen — hete oos doodt cellen en veroorzaakt aerosolen.
  • Praten of hoesten boven de kritische zone — mondkapje verplicht bij celkweek en aseptische bereiding.
  • Tocht en luchtstroom door een openstaande deur — het besmettingsrisico stijgt tot factor tien.
  • LAF-kast te vol — te veel materiaal verstoort de laminaire stroming en creëert dode zones.
  • Vergeten negatieve controle — zonder controleplaat is de sterilisatie niet aantoonbaar.

Aseptische techniek in het onderwijs

Op mbo-, hbo- en universitair niveau wordt aseptisch werken al vroeg aangeleerd omdat het de basis vormt voor vrijwel alle microbiologische en biotechnologische practica. Standaard leeropdrachten zijn de streepplaat, de gietplaatmethode, het maken van een verdunningsreeks en het bereiden van een agarplaat. Basale uitrusting: een bunsen- of teclubrander, entogen, steriele petrischalen, een kleine autoclaaf en handschoenen. Zie ook het overzicht laboratoriumapparatuur voor scholen.

Veelgestelde vragen

Wat is het verschil tussen aseptisch, steriel en desinfecteren?

Steriel is een product-eigenschap: vrij van alle levensvatbare micro-organismen (SAL ≤ 10⁻⁶). Aseptisch is een werkwijze om deze steriliteit te behouden tijdens het gebruik. Desinfecteren is het reduceren van het aantal micro-organismen tot een veilig niveau, zonder dat alle sporen worden gedood. In de praktijk zijn de drie complementair: een gedesinfecteerd oppervlak, steriel materiaal en een aseptische werkwijze zijn samen nodig voor een kiemvrij resultaat.

Waar komt de term aseptisch vandaan en wat zijn synoniemen?

Het woord aseptisch is samengesteld uit het Griekse voorvoegsel a- (zonder) en septos (rot, bederf) — letterlijk dus: zonder bederf of zonder rotting. De verwante term asepsis duidt op de toestand van afwezigheid van pathogene micro-organismen; aseptische techniek is de werkwijze die die toestand bewerkstelligt. Gangbare synoniemen of nauw verwante begrippen zijn: kiemvrij werken, steriel werken (hoewel dit strikt gezien de toestand beschrijft, niet de methode) en in een GMP-context aseptische verwerking of aseptische bereiding. In medische context wordt aseptisch ook gebruikt om weefsel of een ingreep te omschrijven waarbij geen infectie aanwezig is of wordt geïntroduceerd — bijvoorbeeld een aseptische wond of een aseptische operatietechniek.

Wat is het verschil tussen aseptisch en antiseptisch?

Aseptisch en antiseptisch worden soms door elkaar gebruikt maar beschrijven fundamenteel verschillende concepten. Aseptisch betekent het voorkomen van de introductie van micro-organismen in een steriele omgeving, monster of product — de techniek richt zich op het buiten houden van kiemen. Antiseptisch duidt op het doden of remmen van micro-organismen op levend weefsel, zoals huid of slijmvliezen, met behulp van chemische middelen als chloorhexidine, povidonjodium of waterstofperoxide. Antiseptica worden dus aangebracht op een al aanwezige bron van kiemen; aseptische techniek zorgt dat die bron de kritische zone nooit bereikt. Een operatiegebied wordt antiseptisch voorbereid (desinfectie van de huid); de chirurgische handelingen daarna worden aseptisch uitgevoerd.

Waarom wordt 70% ethanol gebruikt en niet 100%?

Puur ethanol verdampt vrijwel direct van een oppervlak en heeft daardoor onvoldoende inwerkingstijd. De aanwezigheid van 30% water zorgt bovendien dat de alcohol de eiwitten en celwanden van micro-organismen kan penetreren en denatureren. Concentraties tussen 60 en 80% hebben de hoogste bactericide werking; boven 90% daalt de effectiviteit sterk. Isopropanol (70%) heeft een vergelijkbare werking en wordt in de farmaceutische praktijk vaak verkozen omdat het minder snel verdampt.

Mag je een bunsenbrander in een laminaire flow-kast gebruiken?

Nee. Open vuur verstoort de laminaire luchtstroming, kan de HEPA-filter beschadigen en creëert een brandrisico in een besloten ruimte met alcoholdampen. In een LAF- of veiligheidskast wordt aseptisch enten gedaan met steriele wegwerp-oosjes of een infrarood-entoog-sterilisator. Een klassieke bunsenbrander hoort thuis op een open werkbank in een microbiologisch practicumlokaal, niet in een cleanroom of celkweekruimte.

Wanneer is aseptisch werken verplicht en wanneer volstaat schoon werken?

De keuze hangt af van drie factoren: het risico voor het product, het risico voor de uitvoerder en de wettelijke context. Als vuistregel gelden de volgende situaties als absoluut vereist voor aseptische techniek: bereiding van parenteralia, oogdruppels of andere steriele geneesmiddelen (EU GMP Annex 1); celkweek met primaire cellen of virale kweken; microbiologische diagnostiek waarbij vals-positieven klinische gevolgen hebben; en elke handeling met materiaal dat niet terminaal gesteriliseerd kan worden. Voor routinematig microbiologisch practicumwerk — agarplaten gieten, bacteriekweken overenten, verdunningsreeksen maken — volstaan schone technieken met bunsenbrander op een stofvrije werkbank, mits de omgeving beheerst is. Zodra celkweek, risicogroep 2 of hoger, of farmaceutische context van toepassing is, is een LAF- of veiligheidskast en volledige aseptische procedure verplicht.

Wat zijn de drie kernredenen om aseptische technieken te gebruiken?

In de literatuur worden drie primaire doelstellingen onderscheiden. Ten eerste productbescherming: het voorkomen dat micro-organismen een steriel product, monster of kweek besmetten, waardoor het onbruikbaar of onveilig wordt. Ten tweede patiënt- en celbescherming: in klinische en celkweekcontext voorkomt aseptisch werken dat de ontvanger — een patiënt of een celkweek — wordt blootgesteld aan exogene pathogenen. Ten derde resultaatintegriteit: in analytische en diagnostische contexten is een niet-besmet monster de voorwaarde voor een interpreteerbaar resultaat; contaminatie maakt onderscheid tussen commensale flora en pathogeen onmogelijk.

Hoe lang blijft een geopende steriele fles bruikbaar?

Zodra een steriele verpakking is geopend, is de steriliteitsstatus in principe direct aan degradatie onderhevig. In een LAF- of veiligheidskast met correcte techniek kan een fles gedurende een sessie (typisch enkele uren) worden gebruikt, mits deze tussentijds gesloten wordt. Buiten een gecontroleerde zone is single-use het veilige uitgangspunt. Voor herhaald gebruik ontworpen flessen (bijv. steriel water of PBS) hebben een fabrieksspecifieke gebruikstermijn na eerste opening; volg altijd de bijsluiter.

Wat is een media fill test?

Een media fill (ook procesvalidatie-simulatie) is een test waarbij de aseptische bereiding wordt uitgevoerd met een steriel groeimedium in plaats van het werkelijke product. Na incubatie wordt beoordeeld of het medium troebel wordt (bewijs van besmetting) of helder blijft. De test valideert de gecombineerde bijdrage van omgeving, materialen en operator. In de farmaceutische praktijk wordt de media fill periodiek herhaald, minimaal jaarlijks per shift en per operator, conform EU GMP Annex 1.

Waarom een negatieve controle bij microbiologisch werk?

De negatieve controle is een niet-geinoculeerde plaat of buis die dezelfde behandeling ondergaat als de monsters. Blijft deze na incubatie steriel, dan is bewezen dat het medium, het materiaal en de aseptische techniek in orde waren. Groei op de negatieve controle betekent dat het resultaat op de monsters niet aan de kweek kan worden toegeschreven maar mogelijk aan contaminatie. Zonder negatieve controle is een microbiologische kweek niet valideerbaar.

Wat is de rol van een settle plate?

Een settle plate is een open agarplaat die gedurende een gedefinieerde tijd (typisch vier uur) in de kritische zone wordt geplaatst om neerdwarrelende deeltjes en micro-organismen af te vangen. Na incubatie wordt het aantal kolonies geteld als maat voor de luchtkwaliteit. EU GMP Annex 1 stelt grenswaarden per graad: < 1 kve per 4 uur voor graad A, < 5 kve per 4 uur voor graad B, < 50 kve per 4 uur voor graad C en < 100 kve per 4 uur voor graad D.

Kun je zonder LAF-kast aseptisch werken?

Voor eenvoudige microbiologische handelingen zoals het uitplaten van een agarplaat, het overenten van bacteriekweken of het bereiden van niet-steriele voedingsbodems is een open werkbank met een bunsen- of teclubrander toereikend, mits de omgeving stofarm is en de deuren gesloten zijn. Voor celkweek, primaire cellen, virale kweken, aseptische farmaceutische bereiding en werk met risicogroep 2 of hoger is een LAF-kast of biologische veiligheidskast verplicht. De keuze hangt af van het besmettingsrisico voor het product en van het risico voor de uitvoerder.

Wat is een Contamination Control Strategy (CCS)?

De Contamination Control Strategy is het gestandaardiseerde document waarin, sinds de herziening van EU GMP Annex 1 (2022), alle maatregelen worden vastgelegd die bijdragen aan de beheersing van microbiele, deeltjes- en endotoxine-contaminatie in een steriele productieomgeving. De CCS beschrijft procesontwerp, cleanroom-classificatie, personeelsbeheer, materiaal- en luchtstromen, sterilisatie, aseptische techniek, bewaking en trending. De CCS is voor GMP-audits een centraal auditobject.

Wat is broth transfer of subcultuur?

Broth transfer is het overbrengen van een klein volume vloeibare kweek (bouillon) naar vers medium om de kweek in een groeifase te houden of te expanderen. De handeling gebeurt aseptisch: flesopeningen worden gevlamd, een steriele pipet wordt gebruikt en de overdracht vindt plaats binnen de kritische zone. Subcultuur is een verwant begrip: het overzetten van een deel van een kweek naar een verse plaat of medium, gebruikt om cellijnen te passeren of om isolaten uit een mengcultuur te zuiveren.

Twijfelt u welk pipettype het beste past bij uw aseptische werkstroom — bijvoorbeeld een elektronische meerkanaalspipet voor plaatvulling of een positive displacement pipet bij vluchtige oplosmiddelen? Doorloop de pipet keuzewijzer voor een gerichte keuze op basis van volumebereik en vloeistofaard.

Waarom worden filterpipetpunten gebruikt bij aseptisch pipetteren?

Filterpipetpunten hebben een hydrofobe membraanbarriere in de tip die voorkomt dat vloeistof of aerosolen in het pipetlichaam terechtkomen. Dit heeft twee gevolgen: de pipet raakt niet besmet met het monster (kruisbesmetting tussen monsters wordt uitgesloten) en de gebruiker wordt beschermd tegen aerosolen van pathogenen. In moleculair werk voorkomen filterpipetpunten ook DNase/RNase-contaminatie van de pipet.

Kun je aseptisch werken zonder handschoenen?

In een niet-GMP-context is het gebruik van gedesinfecteerde handschoenen sterk aanbevolen maar niet strikt verplicht — op voorwaarde dat de handen grondig worden gewassen en met 70% ethanol gedesinfecteerd tussen elke handeling. In een GMP-omgeving, celkweek en klinische bereiding zijn steriele handschoenen verplicht en worden ze periodiek tijdens de sessie herdesinfecteerd. In alle gevallen geldt: gladde synthetische handschoenen (nitril) genereren minder aerosolen dan latex of textiel.

Wat is het verschil tussen steriele en niet-steriele handschoenen?

Niet-steriele handschoenen zijn geproduceerd onder gecontroleerde hygiënische omstandigheden maar zijn niet individueel gesteriliseerd. Ze beschermen de gebruiker tegen chemicaliën en biologisch materiaal en verminderen het risico op besmetting, maar garanderen geen kiemvrij contactoppervlak. Steriele handschoenen zijn individueel verpakt en gesteriliseerd — doorgaans via gammabestraling of ETO — en hebben een gevalideerde SAL van ≤ 10−6. Ze worden aangetrokken via een aseptische donatechniek zodat de buitenzijde niet met een niet-steriele ondergrond in contact komt. In de praktijk geldt: voor standaard microbiologisch labwerk en celkweek volstaan schone, nitril niet-steriele handschoenen die periodiek worden herdesinfecteerd met 70% ethanol. Steriele handschoenen zijn verplicht bij farmaceutische aseptische bereiding in graad A/B-omgevingen, bij het hanteren van eindsteriele medische hulpmiddelen en bij klinische ingrepen waarbij het product of de patiënt direct wordt geraakt.

Wat is aseptische verpakking?

Aseptische verpakking is een productieproces waarbij een steriel product en een steriele verpakking onder aseptische condities worden samengevoegd. De verpakking (folies, flesjes, cups) wordt onafhankelijk van het product gesteriliseerd, bijvoorbeeld met H₂O₂-damp of ETO. Het proces wordt onder meer toegepast in de langhoudbare zuivel, sondevoeding en parenterale geneesmiddelen. De verpakking hoeft niet gekoeld te worden omdat product en verpakking beide steriel zijn en de sluiting hermetisch is.

Wat zijn de grootste risico's bij aseptisch werken door beginners?

De vier klassieke fouten van beginners zijn: het openen van verpakkingen te vroeg (buiten de kritische zone), het aanraken van de binnenkant van een dop, het over een open plaat pipetteren waardoor huidschilfers vallen, en het praten of niezen zonder mondbescherming boven een geopende plaat. Alle vier zijn te voorkomen door bewuste, langzame handelingen en door de checklist «materiaal-omgeving-hand-tijd» consequent toe te passen: is mijn materiaal steriel, mijn omgeving beheerst, mijn hand aseptisch, mijn expositietijd minimaal?

Wie introduceerde het concept van aseptische techniek?

De grondslagen van aseptische techniek worden doorgaans toegeschreven aan de Britse chirurg Joseph Lister, die in de jaren 1860 als eerste systematisch antiseptische middelen (carbolzuur) inzette om postoperatieve infecties te reduceren. De stap van antiseptisch naar werkelijk aseptisch werken — het voorkomen van besmetting in plaats van het achteraf bestrijden ervan — werd gezet door de chirurg Ernst von Bergmann en zijn medewerker Curt Schimmelbusch, die in de jaren 1880 en 1890 stoomsterilisatie van instrumenten en doeken introduceerden en daarmee de moderne aseptische operatietechniek vestigden. In de microbiologie legde Robert Koch met zijn werk aan reinculturen en steriele voedingsbodems in dezelfde periode de basis voor aseptisch labwerk. In de farmaceutische productie werd het principe pas formeel gecodificeerd met de eerste versies van wat nu EU GMP Annex 1 is.

Hoe kan ik bacteriën steriliseren?

Sterilisatie van materialen die bacteriën bevatten of kunnen bevatten, kan via vier hoofdmethoden. Vochtige hitte (autoclaaf): 121 °C gedurende minimaal 15 minuten bij 1 bar overdruk — de meest toegepaste methode voor glaswerk, media en hittebestendige instrumenten. Droge hitte (heteluchtoven): 160–180 °C gedurende 1–2 uur, geschikt voor glaswerk en poedervormige stoffen die geen vocht verdragen. Filtratie: 0,22 μm membraanfilter voor hittelabiele oplossingen zoals serums, enzymen en antibiotica — bacteriën worden fysiek tegengehouden, maar virussen en prionen passeren. Straling: gammastraling of elektronenbundels, industrieel toegepast voor wegwerpartikelen zoals pipetpunten, spuiten en handschoenen. Voor een uitgebreide behandeling van sterilisatieprocessen en -validatie, zie het artikel over autoclaven en de sterilisatienormen ISO 11135/11137/17665.

Gerelateerde artikelen

Meer achtergrond over de bijbehorende technieken en materialen vindt u in de artikelen over steriel of niet-steriel, autoclaven, laboratoriumbranders, zuurkasten en werkkasten, kweekmedia voor microbiologie, kweken van eencelligen, kiemplaat en kolonietelling, Sterility Assurance Level (SAL) en steriliteitstesten in de farma.

Voor aseptisch werken vindt u bij Labvakhandel de benodigde autoclaven en sterilisatoren, steriele petrischalen en kweekplaten, steriele spuitfilters en bunsen- en teclubranders. Neem contact op voor advies over de juiste combinatie voor uw toepassing.

Onderdeel van: Voedingslaboratorium · Farmaceutisch lab · Klinisch laboratorium


Disclaimer: De informatie in dit artikel is bedoeld als algemene technische toelichting. Canidae Seal B.V. / Labvakhandel.nl aanvaardt geen aansprakelijkheid voor de toepassing van deze informatie in specifieke analytische, klinische of industriele situaties. Raadpleeg voor uw eigen toepassing altijd de geldende normen, vakliteratuur en de documentatie van fabrikant en apparatuur.

Bestellijst

Uw winkelwagen is leeg.